二氧化碳培養(yǎng)箱的無污染技術(shù)

 二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境，如穩(wěn)定的溫度（37°C）、穩(wěn)定的CO2水平（5%）、恒定的酸堿度（pH值：7.2-7.4）、較高的相對飽和濕度（95%），來對細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置。

廣泛應(yīng)用于細(xì)胞、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng)，常見于細(xì)胞動(dòng)力學(xué)研究、哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌物的收集、各種物理、化學(xué)因素的致癌或毒理效應(yīng)、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)抗體、體外授精（IVF）、干細(xì)胞、組織工程、藥物篩選等研究領(lǐng)域。在生物活體內(nèi)，生物體有自身的免疫系統(tǒng)保護(hù)細(xì)胞或組織，但是在體外培養(yǎng)時(shí)，沒有任何保護(hù)自己的免疫屏障。

對于二氧化碳培養(yǎng)箱的基本參數(shù)溫度、CO2和濕度，大多數(shù)培養(yǎng)箱都能滿足研究實(shí)驗(yàn)的需要。然而，針對培養(yǎng)過程中面臨的各種污染源，各品牌二氧化碳培養(yǎng)箱的控制方式和效果不盡相同，因此細(xì)胞體外培養(yǎng)中zui大的威脅實(shí)際上是污染問題。二氧化碳培養(yǎng)箱中的主要污染源：細(xì)菌、真菌（霉菌和酵母菌）、病毒、支原體以及非同種細(xì)胞對于細(xì)胞來說，非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染源的生存，培養(yǎng)箱本身是不會(huì)辨別的，而細(xì)胞培養(yǎng)中大部分時(shí)間里細(xì)胞都是被放置于培養(yǎng)箱內(nèi)，因此箱體內(nèi)能否抑菌或滅菌非常關(guān)鍵！

細(xì)菌：細(xì)菌污染后，培養(yǎng)基1-2天就會(huì)渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯，應(yīng)迅速將污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離，滅菌后丟棄，還要用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)。病毒：由于病毒寄生生存，爆發(fā)后盡快和正常細(xì)胞隔離，丟棄處理，相對來說容易處理，病毒污染對操作者威脅較大；盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。潛在的病毒污染是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。

真菌（霉菌和酵母菌）：真菌污染后培養(yǎng)液不變渾濁，不象細(xì)菌污染那么容易被發(fā)現(xiàn)，真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)中zui常見的一種污染；污染后細(xì)胞生長的比較慢，目前沒有好的抑制方法，包括現(xiàn)在常用的兩性霉素，一旦污染容易反復(fù)爆發(fā)，尤其孢子很難殺滅。

支原體：支原體污染細(xì)胞后，不會(huì)使細(xì)胞死亡且可以與細(xì)胞長期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解，外觀上給人以正常感覺，往往被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)者忽視，實(shí)則細(xì)胞已經(jīng)受到多方面潛在影響，如引起細(xì)胞變形，影響DNA合成，抑制細(xì)胞生長等。非同種細(xì)胞：即細(xì)胞交叉污染，由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開，往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。目前，世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無效。

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