細(xì)胞培養(yǎng)常見污染的識(shí)別

⒈細(xì)菌

        識(shí)別：細(xì)菌在顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，有球形，鏈形，桿形等。大家不必深究。只要發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁變黃，培養(yǎng)瓶頂部有一層細(xì)沙一樣的東西。就知道大事不好啦。

        處理：可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理?？梢杂盟沫h(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50 μg/mL；鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。其實(shí)一旦發(fā)生污染，就已經(jīng)大勢(shì)已去了。如果細(xì)胞不是特別特別珍貴的話，還是趁早扔了，重起爐灶吧。

        所以，重要的還是防范于未然。做好培養(yǎng)間，CO2孵箱，器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作。在操作的時(shí)候，嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作規(guī)范。

⒉霉菌

        識(shí)別：因?yàn)榕囵B(yǎng)液是清亮的，所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn)，等發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過(guò)晚了。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，如同風(fēng)中柳絮。細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間一長(zhǎng)，細(xì)胞的狀態(tài)就變差。

        處理：細(xì)胞一旦被霉菌污染，很難挽救，兩性霉素B或制霉菌素都于事無(wú)補(bǔ)，建議果斷舍棄該污染細(xì)胞，將環(huán)境消毒。

        采用酒精底地擦洗一遍CO2培養(yǎng)箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍。把水盤里加上飽和量的硫酸銅。

⒊支原體

        識(shí)別：多為多邊形，培養(yǎng)液一般會(huì)變渾濁。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是和你一起慢慢變老。支原體污染后，可影響的細(xì)胞生長(zhǎng)參數(shù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。

        處理：沒有什么好處理的。直接扔了吧。

⒋黑蛟蟲

        識(shí)別：誰(shuí)都不知道所謂的“黑膠蟲”是什么東西。據(jù)說(shuō)是納米級(jí)的細(xì)菌。低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來(lái)游去。培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響。但是如果太多了，也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

        處理：因?yàn)楦静恢肋@是什么物種，所以也談不上什么處理方式。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率。

⒌真菌

        識(shí)別：真菌污染和霉菌污染差不多。一般培養(yǎng)液清亮，所以很難早期發(fā)現(xiàn)。鏡下有時(shí)候象絲狀，有時(shí)候象珊瑚狀。慢慢地會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。這個(gè)時(shí)候，已經(jīng)晚了，細(xì)胞很難救活了。

        處理：同霉菌污染一樣，沒有什么好處理的，直接扔了吧。然后消毒滅菌培養(yǎng)間，CO2孵箱，器皿和培養(yǎng)液。

        綜上所述，兩個(gè)原則：預(yù)防為主，果斷扔掉。如果細(xì)胞實(shí)在特別特別特別珍貴。那就只好死馬當(dāng)活馬醫(yī)了。用廣譜抗生素5倍推薦濃度沖擊一下。當(dāng)然細(xì)胞狀態(tài)差的話不熬得住。同時(shí)增加傳代時(shí)的細(xì)胞的密度，培養(yǎng)基中的血清濃度，勤換液。也可以不加抗生素進(jìn)行單克隆有限稀釋至96孔板，再克隆化。