煙粉虱寄生蜂寄主競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

溫室

養(yǎng)蟲籠（40 cm × 50 cm × 60 cm）

體視解剖鏡(Motic 140)

昆蟲針

塑料培養(yǎng)皿(直徑815 cm)

數(shù)碼相機(jī)

醫(yī)用注射器

實(shí)驗(yàn)材料

1. 供試植物：盆栽西紅柿

2. 供試?yán)ハx：B型煙粉虱，麗蚜小蜂，淺黃恩蚜小蜂

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 供試?yán)ハx的培養(yǎng)

    (1) 煙粉虱經(jīng)室內(nèi)分子檢測(cè)確認(rèn)為B 型，室內(nèi)用西紅柿飼養(yǎng)，將西紅柿苗(25 cm 高) 接煙粉虱24 h 后置于養(yǎng)蟲籠(40 cm × 50 cm × 60 cm) 內(nèi)，待煙粉虱生長(zhǎng)到一定時(shí)間后，取帶柄的葉片，用脫脂棉包裹葉柄基部，在體視解剖鏡下挑除不需要的若蟲，僅保留3齡末和4 齡初若蟲供試驗(yàn)用；

    (2) 麗蚜小蜂和淺黃恩蚜小蜂室內(nèi)用煙粉虱繁殖多代。蜂發(fā)育到黑蛹期時(shí)將其從葉片上用昆蟲針挑下放入鋪有濕潤濾紙的塑料培養(yǎng)皿(直徑815 cm) 內(nèi)備用。

2. 產(chǎn)卵器長(zhǎng)度及卵大小的測(cè)量及待產(chǎn)卵量統(tǒng)計(jì)

    (1) 在內(nèi)置測(cè)微尺的體視解剖鏡下(Motic 140) 解剖羽化24 h 內(nèi)的雌蜂，測(cè)量雌蜂的產(chǎn)卵器及后足脛節(jié)長(zhǎng)度，查數(shù)待產(chǎn)卵數(shù)量并測(cè)量卵尺寸(長(zhǎng)×寬) ；

    (2) 將羽化后的雌蜂引入(淺黃恩蚜小蜂引入雌雄蜂) 塑料培養(yǎng)皿內(nèi)，供以5 %蜂蜜水，同時(shí)內(nèi)置葉柄包裹有濕潤棉球的西紅柿葉片，25 ℃下至第5 天解剖檢查雌蜂體內(nèi)的待產(chǎn)卵量。根據(jù)羽化蜂的多少，每批解剖5～20 頭，解剖3 批。

3. 產(chǎn)卵行為的觀察

    (1) 在Motic 解剖鏡下觀察蜂的產(chǎn)卵行為并記時(shí)，寄生蜂觸角接觸到煙粉虱若蟲開始，到檢測(cè)完成調(diào)轉(zhuǎn)身體準(zhǔn)備將產(chǎn)卵器插入寄主體內(nèi)的時(shí)間記為寄主檢測(cè)時(shí)間；

    (2) 記錄寄生蜂檢測(cè)過程中的行為，以檢測(cè)圈數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，產(chǎn)卵器插入到拔出的時(shí)間記為產(chǎn)卵時(shí)間。

4. 發(fā)育歷期的比較

    (1) 取干凈無蟲的西紅柿苗放置于飼養(yǎng)煙粉虱的環(huán)境中，12 h 后取出，吹干凈上面的煙粉虱成蟲后將苗置于無蟲的養(yǎng)蟲籠內(nèi)室溫條件下飼養(yǎng)，濕度70 %左右；

    (2) 待煙粉虱若蟲發(fā)育至3 齡后取葉片，保持葉片有4 齡初若蟲蟲量大約20 頭，挑除其余若蟲，用數(shù)碼相機(jī)拍照后打印出來供標(biāo)記用，然后將葉柄基部用脫脂棉包裹，用醫(yī)用注射器吸取一定的水注入脫脂棉中；

    (3) 將葉片放入培養(yǎng)皿內(nèi)(直徑: 815 cm) 引入一頭雌蜂(淺黃恩蚜小蜂為交配過的雌蜂，交配過的雌蜂會(huì)直接產(chǎn)卵在煙粉虱體內(nèi)，而未交配過的雌蜂不會(huì)在煙粉虱體內(nèi)產(chǎn)卵) ，觀察其產(chǎn)卵行為，標(biāo)記產(chǎn)卵寄生的寄主；

    (4) 每12 h 解剖無法從煙粉虱背部看到孵化的寄生蜂幼蟲或卵的煙粉虱若蟲10 頭，觀察寄生蜂的發(fā)育進(jìn)度，對(duì)可以從背部觀察到的，則直接記錄。寄生蜂化蛹后每12 h 觀察一次記錄化蛹時(shí)間，最后統(tǒng)計(jì)羽化蜂的數(shù)量。每種蜂接蜂15 頭，觀察所有被寄生粉虱體內(nèi)蜂的發(fā)育。

5. 兩種蜂間的寄主競(jìng)爭(zhēng)

    (1) 根據(jù)羽化雌蜂的待產(chǎn)卵量，每處理提供4 齡初煙粉虱若蟲10 頭(一張番茄葉片上) ，引入麗蚜小蜂和淺黃恩蚜小蜂雌蜂各一頭，記為Ef Es 處理，同時(shí)設(shè)引入兩頭麗蚜小蜂(記為Ef Ef 處理) 或淺黃恩蚜小蜂(記為Es Es 處理) 為對(duì)照，放入光照培養(yǎng)箱中， 24 h 后去除蚜小蜂，解剖所有煙粉虱若蟲，每處理重復(fù)25 次，分別記錄每頭寄主體內(nèi)麗蚜小蜂和淺黃恩蚜小蜂的卵量。若某重復(fù)內(nèi)供試煙粉虱被取食數(shù)量超過60 % ，則統(tǒng)計(jì)分析時(shí)剔除該重復(fù)。

6. 數(shù)據(jù)分析

    (1) 利用SAS910 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較。兩種蜂生物學(xué)特性數(shù)據(jù)的比較等用t 測(cè)驗(yàn)進(jìn)行分析，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析中，若是兩組數(shù)據(jù)，則采用t 測(cè)驗(yàn)進(jìn)行分析比較; 對(duì)兩組以上采用ANOVA 進(jìn)行方差分析，然后采用Tukey’s HSD test 進(jìn)行平均數(shù)之間的比較。